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蛋白质组学研究，样本准备知多少？
俗话说好的开始是成功的一半，要想实验成功，除了要有好的idea，样本采集和预处理也至关重要。那么蛋白质组学研究中应该如何处理样本呢？今天咱们就来聊聊蛋白质组学研究中那些常见样本的准备！
动物篇
取新鲜组织，剔除血管、脂肪、结缔组织等与研究无关的干扰组织；
用生理盐水或PBS清洗血渍和污染物，用无尘吸水纸吸去表面液体；
将组织剪切成边长 0.5 cm 小块或 100 mg 左右小块；
将组织块用液氮速冻5 min以上，并于-80℃保存。
脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤等常规动物组织，定量蛋白质组推荐送样量＞200 mg；修饰蛋白质组推荐送样量＞500 mg。
植物篇
地上部分在样本离体前用无菌水清洗杂质，水干后采集样本；地下部分在样本离体后，用预冷的PBS清洗杂质，无尘纸吸干后采集样本；
去除非目标组织及衰老、霉变等干扰部分；
样品剪切成小块，锡纸包裹或放入冻存管中；
将组织块液氮速冻5 min以上，并于-80℃保存。
幼嫩的根、叶、花、愈伤组织等常规植物组织，定量蛋白质组推荐送样量＞1g；修饰蛋白质组推荐送样量＞2 g。
血液篇
血浆样本
使用EDTA抗凝剂和蛋白酶抑制剂的血常规管采集血液；
轻轻地上下颠倒混匀 8-10 次；
立即4℃，1600 g离心 10 min；
用移液器将血浆转移到离心管中，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心。
血清样本
使用真空采血管收集血液；
轻轻地上下颠倒混匀5-6 次；
4℃，静置15-30 min；
4℃，1600 g离心10 min；
用移液器将上层淡黄色血清转移到离心管中，加入蛋白酶抑制剂，混匀，瞬时离心。
血浆/血清样本，定量蛋白质组推荐送样量＞500 ul。
细胞篇
贴壁细胞
细胞培养至覆盖度70-90%；
去培养基，培养皿用10 ml PBS洗3次，培养皿倒扣，将液体控干；
培养皿置于冰上，胰蛋白酶消化后，加入PBS悬浮细胞；
收集到15 ml离心管中，4℃，400 g-1000 g离心5-10 min，去PBS；
1 ml PBS重悬细胞后转移到新的1.5 ml离心管；
再次用上述条件离心，尽可能将上清去除干净；
用适量PBS重悬，液氮速冻，并于-80℃保存。
悬浮/贴壁细胞，定量蛋白质组推荐送样量＞1×107个细胞或体积＞50ul细胞沉淀；
磷酸化蛋白质组推荐送样量＞5×107个细胞或体积＞200ul细胞沉淀；
乙酰化、泛素化蛋白质组＞1×108个细胞或体积＞500ul细胞沉淀。
<p style="font>微生物篇
离心法或其他方法分离菌和培养基；
收集菌体到15 ml离心管，用10 ml PBS洗3次；
用1 ml PBS 重悬菌体，转移到1.5 ml离心管中离心，用枪头吸去上清，记录菌的湿重或体积；
用适量PBS重悬，每管100 ul分装，液氮速冻，并于-80℃保存。
微生物菌体，定量蛋白质组推荐送样量湿重＞100mg或体积＞100ul；修饰蛋白质组推荐送样量湿重＞300mg或体积＞300ul。
胶点胶条篇
胶点胶条
胶点/胶条或者泳道皆可，推荐考马斯亮蓝染色，要求条带清晰，无降解。
IP / Co-IP / Pull-down样本
蛋白洗脱液要求蛋白总量＞5ug，蛋白溶液进行SDS－PAGE电泳，下方两种电泳方式任选其一即可。
蛋白洗脱液，跑分离胶5cm（不含浓缩胶的SDS－PAGE），切下5cm胶条，放入1.5ml离心管中。
蛋白洗脱液，跑SDS－PAGE标准的胶，切下目标条带即可，放入1.5ml离心管中。
考虑到动物、植物、细胞、微生物、胶点胶条大家关注度较高，今天小编就先为大家介绍到这里，如果你手上有更加棘手的特殊样本，不知道如何处理，也可以给小编留言！分享完常见样本的采集和预处理，下期将会给大家整理不同类型样本蛋白质提取方法，敬请关注www.www.skhbd.com～
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